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病原監(jiān)控專題丨susMDCK懸浮細(xì)胞分離流感病毒：與繁重工作說拜拜
流感監(jiān)控網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室常用MDCK細(xì)胞系來進(jìn)行季節(jié)性流感病毒的分離
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流感監(jiān)控網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室常用MDCK細(xì)胞系來進(jìn)行季節(jié)性流感病毒的分離，該細(xì)胞系是由Madin和Darby在1958年從美國Cocker Spaniel母曲架犬的腎臟組織分離培育出的，通常是以貼壁方式生長的上皮樣細(xì)胞。由于其病毒感染效率高，增值快，且不易變異，MDCK細(xì)胞系廣泛應(yīng)用于多種病毒的分離培養(yǎng)，常被用于疫苗生產(chǎn)。
傳統(tǒng)的MDCK細(xì)胞系培養(yǎng)，采用有血清的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)方式。然而血清成分復(fù)雜，含有對(duì)細(xì)胞有害的成分，后期產(chǎn)物分離純化難度大。另外，血清來源有限，價(jià)格昂貴，生產(chǎn)成本高；而且血清的質(zhì)量因動(dòng)物個(gè)體、血清產(chǎn)地、生產(chǎn)批號(hào)不同而產(chǎn)生波動(dòng)，使得實(shí)驗(yàn)和生產(chǎn)難以實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化。
通過對(duì)傳統(tǒng)MDCK細(xì)胞的無血清培養(yǎng)馴化，加上高表達(dá)的表面受體——α-2,6Gal Sa受體蛋白，可以使該細(xì)胞系與流感病毒表面HA基因更好地結(jié)合，達(dá)到高效分離流感病毒的目的。目前，懸浮細(xì)胞分離病毒已廣泛被使用。susMDCK懸浮細(xì)胞生長不依賴支持物表面，由于缺乏粘附分子的表達(dá)，在培養(yǎng)基中便自然呈現(xiàn)懸浮狀態(tài)。因此在細(xì)胞培養(yǎng)與傳代時(shí)，使用無血清培養(yǎng)液，并且只需要直接稀釋或離心稀釋，無需胰酶消化。相較于傳統(tǒng)MDCK貼壁細(xì)胞具有操作簡便，分離率高，分離周期短的優(yōu)勢(shì)。
sus-MDCK懸浮細(xì)胞
分離病毒的優(yōu)勢(shì)
細(xì)胞傳代——只需稀釋，無需胰酶消化，且無需牛血清，使用susMDCK懸浮細(xì)胞專用的M-SUS培養(yǎng)液即可；
標(biāo)本接種——無需洗滌細(xì)胞，無病毒吸附過程，直接加入標(biāo)本培養(yǎng)；
病毒收獲和鑒定——隨時(shí)可取出進(jìn)行血凝試驗(yàn)，若滴度小于8，則可以繼續(xù)培養(yǎng)，直到滴度滿足要求。
懸浮的susMDCK細(xì)胞通過增加病毒吸附表面積和流感病毒的受體，提高了吸附病毒的能力。對(duì)H1N1pdm09亞型和乙型流感病毒，尤其是對(duì)近年來因基因位點(diǎn)發(fā)生變異導(dǎo)致很難分離的季節(jié)性H3亞型流感病毒，分離培養(yǎng)的優(yōu)勢(shì)十分顯著(如圖1)。
另外，與貼壁細(xì)胞相比可以顯著提高病毒分離培養(yǎng)的陽性率和病毒滴度（如圖2）。
圖1 H3N2懸浮細(xì)胞培養(yǎng)物的血凝實(shí)驗(yàn)結(jié)果
圖2 兩種類型細(xì)胞對(duì)隨機(jī)樣本
分離培養(yǎng)陽性率的比較
高效分離流感病毒的
susMDCK懸浮細(xì)胞產(chǎn)品
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無需試劑耗材，可直接進(jìn)行病毒分離培養(yǎng)。
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